Laboratorio 2

Separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía en papel

Materiales:
-Mortero
-Tijeras
-Espinacas u hojas verdes
-Embudo con papel de filtro
-Tubo de ensayo en gradilla
-Éter etílico
-Alcohol metílico puro (cuidado, sus vapores son muy tóxicos)
-Cápsula de Petri o vaso de precipitados
-Capilar o micropipeta (cuentagotas en su defecto)
-Tira de papel cromatográfico Wathman (con un buen papel de filtro se obtienen, incluso, mejores resultados)

Introducción:
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (rojo-anaranjado) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.

Fundamento:
Todas estas sustancias presentan un grado diferente de solubilidad en disolventes apolares, lo que permite su separación cuando una solución de las mismas asciende por capilaridad a través de una tira de papel poroso (papel de cromatografía o de filtro) dispuesta verticalmente sobre una película de un disolvente orgánico (etanol), ya que las más solubles se desplazarán a mayor velocidad, pues acompañarán fácilmente al disolvente a medida que éste asciende. Las menos solubles avanzarán menos en la tira de papel de filtro.
Aparecerán, por tanto, varias bandas de diferentes colores (hasta siete o más, dependiendo del material utilizado) que estarán más o menos alejados de la disolución alcohólica según la mayor o menor solubilidad de los pigmentos. Estas bandas poseerán diferente grosor, dependiendo de la abundancia del pigmento en la disolución.

Técnica:
1. Colocar en un mortero trozos de hojas lavadas, quitando las nerviaciones más gruesas, junto con 10 o 15 cc. de éter etílico.
2. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa (utilizar campana de gases a lo largo de toda la práctica).
3. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es suficiente con 2 o 3 cc. de solución de pigmentos).
4. Colocar en la tapadera de una caja de Petri, metanol absoluto hasta una altura de 0,5 a 1 cm.
5. Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cms.de anchura y unos 10 a 15 cms. de altura.
6. Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de solución de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secándose el éter etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se pondrán siempre en el mismo punto (se puede marcar con un lápiz), situado a 2 cms. por encima del borde inferior del papel.
7. Doblar el papel cromatográfico a lo largo y colocarlo en la placa de petri con la mancha de pigmento a 1 cm. de la superficie del eluyente. Podemos sustituir la placa de petri por un vaso de precipitados y fijar el papel cromatográfico con una pinza a un soporte horizontal colocado en el borde del vaso (por ejemplo, una varilla de vidrio).
8. Esperar unos 30 minutos.





Extracción de ADN de células animales

Material:
-Higadito de pollo
-Mortero
-Pipeta
-Probetas
-Alcohol etílico de 96º
-Azul de metileno
-Lavavajillas
-Zumo de piña
-Papel de filtro
-Varillas de vidrio
-Embudos

Método experimental:
tritura un higadito de pollo en un mortero. Añade al triturado 200ml. de agua destilada y remueve hasta hacer una especie de papilla. La papilla debe quedar opaca, nunca transparente.
Filtra varias veces la papilla en un embudo con papel de filtro sobre una probeta.
Vierte la pasta que queda en el filtro en otra probeta y anota el volumen.
Añade una cantidad de detergente equivalente a una cuarta parte del volumen de la pasta. Remueve suavemente hasta que la pasta quede homogénea.
Añade 10 ml. de zumo de piña y sigue removiendo la mezcla unos cinco minutos.
Vierte la mezcla en otra probeta más ancha y añade poco a poco con una pipeta 50 ml. de alcohol frío. El alcohol debe resbalar por las paredes de la probeta para evitar que se mezcle con la pasta.
Dejar reposar la mezcla sin agitar ni remover. Al cabo de unos minutos verás que se forman dos fases: en el fondo estará el agua con las proteínas y en la parte superior estará el alcohol con el ADN en forma de filamentos blancos. Sumerge la varilla de vidrio solo en la parte del alcohol y muévela siempre en la misma dirección hasta que los filamentos blancos se adhieran a la varilla. ¡Ya has extraído el ADN del hígado!.
Añade azul de metileno y observa las fibras al microscopio.



       


Activación y desnaturalización de la enzima catalasa.

Fundamento:
La catalasa es una enzima presente en todas las células. Su acción consiste en reducir el agua oxigenada (producto tóxico para las células), convirtiéndola en agua y oxígeno molecular. Se encuentra en el interior de unos orgánulos, los peroxisomas encargados de la detoxificación de las sustancias de las sustancias, muy abundantes en el hígado de los animales y en los órganos de reserva de vegetales, por ejemplo la patata. Su presencia es fácil de detectar ya que si se añade agua oxigenada a un tejido fresco que contenga dicha enzima se observa la emisión de burbujas de oxígeno, como resultado de la acción de la enzima. En el laboratorio vamos a demostrar cómo diversos factores pueden influir en la actividad enzimática de la catalasa.

Objetivos:
1. Demostrar la actividad de una enzima, la catalasa presente en la patata.
2. demostrar cómo diversos factores del medio pueden "inactivar" su función.

Materiales:
-Tubos de ensayo
-Ácido clorhídrico
-Patata
-Agua
-Agua oxigenada

Técnica de la práctica:
Toma cuatro tubos de ensayo e introduce en ellos lo siguiente:
Tubo 1. Introduce un pequeño trozo de patata cruda, a temperatura normal y añádele 10 ml. de agua oxigenada comercial.
Tubo 2. Introduce la misma cantidad de patata cruda, a temperatura normal, pero previamente triturada. Añádele 10 ml. de agua oxigenada comercial.
Tubo 3. Se introduce la misma cantidad de patata cruda pero previamente hervida y 10 ml. de agua oxigenada comercial.
Tubo 4. Se introduce la misma cantidad de patata cruda pero previamente mantenida en ácido clorhídrico (durante diez minutos). Se añaden 10 ml. de agua oxigenada comercial.